Plásmido CRISPR de Activación (h) SEMA3A: sc-400716-ACT

El gen humano **SEMA3A** codifica la **Semaforina-3A**, una señal de guía secretada que actúa principalmente a través de los receptores de neuropilina (NRP1/NRP2) y plexina-A para regular la orientación axonal, la migración neuronal y el patrón sináptico. Más allá del sistema nervioso, SEMA3A influye en la remodelación del citoesqueleto, la dinámica de las adhesiones focales y la señalización de GTPasas de la familia Rho, dando forma a la motilidad celular, la adhesión y la organización tisular. Está implicada en la angiogénesis y en la regulación inmunitaria, incluida la modulación de las respuestas de células dendríticas y linfocitos T, lo que vincula la señalización de las semaforinas con microambientes inflamatorios. La expresión desregulada de SEMA3A o la alteración de la actividad de su vía se ha asociado con procesos del neurodesarrollo y la neurodegeneración, el remodelado vascular y las interacciones tumor–estroma relevantes para la biología del cáncer.

SEMA3A El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SEMA3A sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SEMA3A El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SEMA3A en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SEMA3A, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SEMA3A. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SEMA3A y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SEMA3A en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SEMA3A en células tumorales con expresión de SEMA3A silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.