Selenoprotein K CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-407002

Übersicht

SELENOK kodiert Selenoprotein K, ein kleines Membranprotein des endoplasmatischen Retikulums, das Selenocystein enthält und die Redox-Homöostase in Immun- und sekretorischen Zellen unterstützt. Selenoprotein K ist an der ER-assoziierten Qualitätskontrolle beteiligt und steht über die Interaktion mit dem DHHC6-Palmitoyltransferase-Komplex mit dem Kalziumfluss und der Proteinpalmitoylierung in Verbindung, wodurch Rezeptorsignale und die Membranorganisation beeinflusst werden. Es trägt zu einer effizienten Aktivierung von Immunzellen, zu oxidativen Stressantworten und zur Proteostase unter entzündlichem oder metabolischem Stress bei. Eine veränderte SELENOK-Aktivität wurde mit einer fehlregulierten inflammatorischen Signalübertragung und Phänotypen in Zusammenhang gebracht, die für die Biologie immunvermittelter und neurodegenerativer Erkrankungen relevant sind.

Das Selenoprotein K CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des SELENOK-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des SELENOK-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von SELENOK nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Selenoprotein K-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von SELENOK-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Selenoprotein K-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf SELENOK-Exone abzielen, die für die Selenoprotein K-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere SELENOK-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Selenoprotein K CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Selenoprotein K CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des SELENOK-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Selenoprotein K HDR-Plasmid (h) und Selenoprotein K HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von SELENOK-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten SELENOK-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.