Plasmide CRISPR d'Activation (h) SELENBP1: sc-403679-ACT

SELENBP1 (selenium-binding protein 1) est une protéine cytosolique associée au sélénium, impliquée dans l’homéostasie rédox cellulaire et la régulation métabolique. Des rôles ont été rapportés dans des processus liés à la détoxification ainsi que dans la modulation du repliement des protéines et des réponses au stress oxydatif. Son expression est fréquemment modifiée dans de nombreux types de tumeurs et dans des contextes inflammatoires, ce qui en fait un indicateur moléculaire utile des changements d’état de différenciation, de l’adaptation cellulaire au stress et du remodelage métabolique. SELENBP1 a été associée à des voies qui recoupent la gestion des espèces réactives de l’oxygène, le métabolisme des xénobiotiques et les transitions d’état cellulaire influençant les phénotypes de prolifération et de migration. En conséquence, SELENBP1 est couramment étudiée comme marqueur fonctionnel et régulateur dans des modèles mécanistiques de biologie du cancer, de remodelage tissulaire et de signalisation sensible au stress.

SELENBP1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SELENBP1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SELENBP1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SELENBP1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SELENBP1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SELENBP1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SELENBP1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SELENBP1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SELENBP1 dans les cellules tumorales présentant une expression de SELENBP1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.