SELB CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-409155

Übersicht

EEFSEC kodiert den selenocystein-spezifischen Translations-Elongationsfaktor SELB (eEFSec), eine zentrale Komponente der spezialisierten Maschinerie, die während der Synthese menschlicher Selenoproteine Selenocystein an UGA-Codons einbaut. SELB wirkt mit SECIS-bindenden Faktoren und Sec-tRNA zusammen, um das translationale Recoding zu unterstützen, und beeinflusst dadurch die zelluläre Redoxhomöostase, Antworten auf oxidativen Stress sowie die Proteinkontrolle durch die Produktion von Selenoenzymen. Durch die Regulation der Aktivität antioxidativer und thiolbasierter Redoxwege kann die EEFSEC-Aktivität die Anfälligkeit für oxidative Schäden und stressadaptive Signalprozesse beeinflussen. Eine Dysregulation der Selenoprotein-Biosynthese wurde mit einem veränderten Entzündungsniveau und metabolischen Phänotypen in Verbindung gebracht, was EEFSEC zu einem relevanten Ziel für mechanistische Studien zur krankheitsassoziierten Redoxbiologie macht.

Das SELB CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des EEFSEC-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des EEFSEC-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von EEFSEC nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die SELB-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von EEFSEC-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der SELB-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf EEFSEC-Exone abzielen, die für die SELB-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere EEFSEC-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom SELB CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom SELB CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des EEFSEC-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das SELB HDR-Plasmid (h) und SELB HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von EEFSEC-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten EEFSEC-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.