Plasmide CRISPR/Cas9 KO Seipin (m): sc-420617

Présentation

Le gène murin *Bscl2* code la seipine, une protéine membranaire du réticulum endoplasmique qui coordonne l’adipogenèse, la biogenèse des gouttelettes lipidiques et le stockage des lipides neutres en régulant les flux de triglycérides et de phospholipides aux jonctions RE–gouttelettes lipidiques. La seipine favorise une morphologie correcte des gouttelettes lipidiques et limite l’accumulation aberrante d’intermédiaires lipidiques susceptibles de perturber l’homéostasie du RE et la composition des membranes. L’altération de la fonction de la seipine est associée à des phénotypes de lipodystrophie et à une signalisation métabolique modifiée, et elle a également été liée à des processus neurodégénératifs dans certains contextes génétiques. *Bscl2* constitue donc un nœud pertinent pour étudier, dans des modèles murins, les voies de l’homéostasie lipidique, les sites de contact entre organites et la vulnérabilité métabolique spécifique de certains types cellulaires.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Seipin (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Bscl2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Bscl2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Bscl2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Seipin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Bscl2 pour l'étude de la signalisation de Seipin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Bscl2 essentiels à la fonction de Seipin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Bscl2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Seipin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Seipin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Bscl2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Seipin plasmide HDR (m) et le Seipin (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Bscl2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Bscl2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.