Sec8 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422866

Übersicht

Exoc4 kodiert Sec8, eine essenzielle Untereinheit des oktameren Exocyst-Komplexes, der das Andocken sekretorischer Vesikel an definierte Stellen der Plasmamembran vor der SNARE-abhängigen Fusion vermittelt. In Maus-Zellen trägt Sec8 zur Koordination polarisierter Exozytose und des Membrantransports bei, die Prozesse wie epitheliale Polarität, Neuritenauswachsen, Zytokinese und Rezeptorrecycling unterstützen, und integriert dabei Signale kleiner GTPasen wie Ral, Rab und Cdc42. Die Exocyst-Funktion ist eng mit der Umgestaltung des Zytoskeletts und gerichteter Zellmigration verknüpft, wodurch Sec8 ein geeigneter Knotenpunkt für die Untersuchung von Signalwegen ist, die Gewebeorganisation und die Genauigkeit des intrazellulären Transports steuern. Eine Fehlregulation des exocyst-abhängigen Traffickings wurde mit veränderter Zellpolarität und aberranten Signaldynamiken in Verbindung gebracht, was für die Entwicklungs- und Neurobiologieforschung relevant ist.

Das Sec8 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Exoc4-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Exoc4-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Exoc4 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Sec8-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Exoc4-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Sec8-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Exoc4-Exone abzielen, die für die Sec8-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Exoc4-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Sec8 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Sec8 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Exoc4-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Sec8 HDR-Plasmid (m) und Sec8 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Exoc4-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Exoc4-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.