Sec61β CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-425892

概要

SEC61BはSec61トランスロコンのβサブユニットをコードしており、これは小胞体（ER）膜チャネルの中核構成要素として、翻訳と同時に行われるタンパク質の取り込みや、新生ポリペプチドの分泌経路への組み込みを媒介します。マウス細胞では、Sec61βはERタンパク質の生合成を支え、リボソームのドッキングと協調し、折り畳みおよびER関連分解（ERAD）に結び付いたERプロテオスタシス機構にも寄与します。トランスロコン機能が変化すると、分泌、膜タンパク質の恒常性、ならびに小胞体ストレス応答（UPR）シグナル伝達が乱れ得るため、SEC61複合体の活性は細胞のストレス適応と関連付けられています。分泌経路の健全性は免疫シグナル、代謝、神経機能の基盤でもあることから、Sec61bはプロテオスタシス破綻やストレス関連疾患の機序という文脈でしばしば研究対象となります。

Sec61β CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるSec61b遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Sec61b内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Sec61bのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Sec61βタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Sec61βシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Sec61b欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Sec61βの機能に不可欠なSec61bエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Sec61bゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Sec61β CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびSec61β CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Sec61b遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Sec61β HDRプラスミド（m）および Sec61β HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSec61bホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSec61b標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。