Plásmido Doble Nickase (h) Sec5: sc-405088-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)Sec5 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Sec5 (h) y el plásmido de doble nickasa Sec5 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a EXOC2. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Sec5 Anticuerpo (F-7): sc-393230
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) Sec5 | sc-405088-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) Sec5 | sc-405088-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen humano **EXOC2** codifica **Sec5**, una subunidad esencial del complejo de anclaje exocisto, de ocho subunidades, que coordina espacialmente el acoplamiento y la fusión de vesículas secretoras en la membrana plasmática. Sec5 integra señales de pequeñas GTPasas, incluidas **RalA/RalB**, para acoplar el tráfico vesicular con la exocitosis polarizada, la remodelación de membranas y la entrega dirigida de receptores y moléculas de adhesión. A través de estas funciones, EXOC2 contribuye a procesos como la migración celular, la citocinesis y el mantenimiento de la polaridad epitelial, y su desregulación se ha asociado con salidas de señalización alteradas vinculadas a la transformación oncogénica y al comportamiento invasivo. Sec5 también se ha utilizado para investigar cómo el tráfico dependiente del exocisto moldea el reciclaje de receptores y la organización de vías en diversos tipos celulares humanos.
Sec5 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus EXOC2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de EXOC2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de EXOC2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con EXOC2 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.