SEC13 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-431017

Descripción general

Sec13 codifica SEC13, un componente central del complejo de cubierta COPII que impulsa la selección de carga y la gemación de vesículas desde los sitios de salida del retículo endoplásmico para sostener el tráfico del RE al Golgi. Más allá de su función en la vía secretora, SEC13 participa en la arquitectura del complejo del poro nuclear y contribuye a la regulación de la homeostasis celular mediante un control, dependiente del tráfico de membranas, de la localización y el recambio de proteínas. La alteración del transporte dependiente de SEC13 puede perturbar la proteostasis, la señalización de estrés y la coordinación del ciclo celular, lo que convierte a Sec13 en un nodo útil para estudiar vías que conectan la secreción, la dinámica de membranas y el intercambio núcleo‑citoplasmático. En sistemas murinos, los modelos de pérdida de función de Sec13 son relevantes para investigar cómo el tráfico y los procesos asociados al poro influyen en el desarrollo y en fenotipos celulares vinculados a enfermedades.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO SEC13 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Sec13 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Sec13 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Sec13 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína SEC13.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Sec13 para la investigación de la señalización de SEC13, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Sec13 críticos para la función de SEC13
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Sec13 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido SEC13 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido SEC13 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Sec13. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR SEC13 (m) y el plásmido HDR SEC13 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Sec13 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Sec13 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.