Plasmide CRISPR/Cas9 KO SDS3 (h): sc-413010

Présentation

SUDS3 code SDS3, un composant central du complexe corépresseur transcriptionnel Sin3A/HDAC, qui couple le remodelage de la chromatine à la désacétylation des histones. En recrutant HDAC1/2 et des facteurs associés, SDS3 contribue à des programmes de répression transcriptionnelle qui façonnent la progression du cycle cellulaire, la spécification des lignages et les réponses aux signaux du développement et au stress. La régulation de la chromatine dépendante de SDS3 influence la stabilité du génome et l’homéostasie épigénétique, reliant une composition ou une activité altérées du complexe à des états d’expression génique aberrants. La dérégulation de la répression médiée par Sin3/HDAC et des voies épigénétiques associées est fréquemment impliquée en cancérologie, ainsi que dans des contextes plus larges de phénotypes neurodéveloppementaux et liés à la différenciation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SDS3 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SUDS3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SUDS3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SUDS3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SDS3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SUDS3 pour l'étude de la signalisation de SDS3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SUDS3 essentiels à la fonction de SDS3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SUDS3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SDS3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le SDS3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SUDS3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SDS3 plasmide HDR (h) et le SDS3 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SUDS3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SUDS3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.