SCUBE2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-410079-ACT

SCUBE2 (signal peptide, CUB domain, EGF-like domain-containing 2) kodiert ein sezerniertes, zelloberflächenassoziiertes Glykoprotein, das die extrazelluläre Signalübertragung und die Zell-Zell-Kommunikation moduliert. Über seine CUB- und EGF-ähnlichen Domänen ist SCUBE2 an der Regulation der Verfügbarkeit von Wachstumsfaktoren sowie der Dynamik der Rezeptorsignalisierung beteiligt; berichtet wurden zudem Zusammenhänge mit Entwicklungsprogrammen und dem Verhalten endothelialer oder epithelialer Zellen. Eine veränderte SCUBE2-Expression wurde in mehreren krankheitsrelevanten Kontexten, darunter Krebsbiologie und vaskuläres Remodeling, mit fehlregulierter Proliferation, Migration und Differenzierung in Verbindung gebracht. Als signalweggekoppelter extrazellulärer Regulator wird SCUBE2 häufig hinsichtlich seines Einflusses auf Signalnetzwerke untersucht, die die Gewebeorganisation und Interaktionen in der Tumormikroumgebung prägen.

SCUBE2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SCUBE2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

SCUBE2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SCUBE2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SCUBE2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen SCUBE2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SCUBE2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von SCUBE2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des SCUBE2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SCUBE2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.