Scrib CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-430616

Übersicht

Scrib kodiert Scribble, ein konserviertes Polaritäts-Scaffold-Protein, das an Zell-Zell-Kontakten lokalisiert und die apikal-basal gerichtete Polarität, die Epithelarchitektur sowie die gerichtete Zellmigration koordiniert. In Mausmodellen integriert Scribble Signale aus Polaritätsnetzwerken mit Regulatoren von Zellkontakten und Zytoskelett und beeinflusst dadurch Prozesse wie planare Zellpolarität, Vesikeltransport und Gewebemorphogenese. Eine Störung der SCRIB-abhängigen Polaritätskontrolle ist mit veränderter Proliferation und Invasivität verbunden und verknüpft diesen Signalweg mit Entwicklungsstörungen und krebsrelevanten Phänotypen. Scrib wird daher häufig in Kontexten untersucht, in denen die Integrität von Zellkontakten, Migration und polaritätsabhängige Signalübertragung die Gewebeorganisation und Krankheitsmechanismen prägen.

Das Scrib CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Scrib-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Scrib-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Scrib nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Scrib-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Scrib-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Scrib-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Scrib-Exone abzielen, die für die Scrib-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Scrib-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Scrib CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Scrib CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Scrib-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Scrib HDR-Plasmid (m) und Scrib HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Scrib-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Scrib-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.