SCP-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423231

Übersicht

Sycp1 codiert das synaptonemale-Komplex-Protein 1 (SCP-1), eine meiosespezifische Strukturkomponente des synaptonemalen Komplexes, die sich während der Prophase I entlang homologer Chromosomen anlagert. SCP-1 unterstützt die Synapsis der Chromosomen, fördert die Ausbildung von Crossovers und hilft, Rekombinations- und DNA-Reparaturereignisse zu koordinieren, die für eine korrekte Segregation in Spermatocyten und Oozyten erforderlich sind. Störungen der SYCP1-abhängigen Synapsis werden mit meiotischem Arrest und der Bildung aneuploider Gameten in Verbindung gebracht, was Sycp1 für Studien zur Unfruchtbarkeit und zur Entwicklung von Keimzellen relevant macht. In der Maus wird Sycp1 häufig als Marker und als mechanistischer Knotenpunkt genutzt, um den meiotischen Verlauf, Checkpoint-Signale und die Integrität von Rekombinationswegen zu untersuchen.

Das SCP-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Sycp1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Sycp1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Sycp1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die SCP-1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Sycp1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der SCP-1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Sycp1-Exone abzielen, die für die SCP-1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Sycp1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom SCP-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom SCP-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Sycp1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das SCP-1 HDR-Plasmid (m) und SCP-1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Sycp1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Sycp1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.