SCG10 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2): sc-422814-KO-2
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- SCG10 Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (m2) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im SCG10-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: SCG10: sc-135620
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
SCG10 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) | sc-422814-KO-2 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
Stmn2 kodiert SCG10, ein neuronreich exprimiertes Mitglied der Stathmin-Familie, das an Tubulin bindet und die Destabilisierung von Mikrotubuli fördert. Dadurch unterstützt es den dynamischen Umbau des Zytoskeletts während des Neuritenauswuchses und der Axonführung in der Entwicklung des Nervensystems der Maus. Die SCG10-Aktivität beeinflusst das Verhalten des Wachstumskegels, den intrazellulären Transport und aktivitätsabhängige Plastizität, indem sie Signaleingänge mit dem Mikrotubuli-Umsatz koppelt. Eine Fehlregulation von STMN2/SCG10 wurde mit neuronalen Stressantworten und veränderter Axon-Erhaltung in Verbindung gebracht und ist daher für Untersuchungen zur Neurodegeneration und zur Vulnerabilität von Motoneuronen relevant. In zellulären Modellen wirkt sich eine Störung von SCG10 auf Programme der neuronalen Differenzierung, Phänotypen der Axonregeneration und zytoskelettabhängige synaptische Prozesse aus.
Das SCG10 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Stmn2-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Stmn2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Stmn2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die SCG10-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Stmn2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der SCG10-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf Stmn2-Exone abzielen, die für die SCG10-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere Stmn2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom SCG10 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom SCG10 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Stmn2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das SCG10 HDR-Plasmid (m) und SCG10 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Stmn2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Stmn2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.