Particules Lentivirales d'Activation (h2) SCD5: sc-402860-LAC-2

La SCD5 humaine (stéaroyl‑CoA désaturase 5) code une désaturase Δ9 associée au réticulum endoplasmique, qui introduit une double liaison cis dans des acyl‑CoA d’acides gras saturés, générant des acides gras mono‑insaturés qui modèlent la composition des membranes, la biologie des gouttelettes lipidiques et la biosynthèse des phospholipides et des triacylglycérols. En régulant le rapport entre acides gras saturés et mono‑insaturés, SCD5 influence l’homéostasie lipidique cellulaire ainsi que des voies de signalisation métabolique liées aux réponses au stress du RE et à l’équilibre rédox. Une expression dérégulée de SCD5 a été impliquée dans les altérations du métabolisme lipidique observées dans les troubles métaboliques et dans les phénotypes moléculaires de plusieurs cancers, où des modifications de la désaturation peuvent affecter les programmes de prolifération et de différenciation. L’édition génomique de SCD5 dans des modèles cellulaires humains permet des études mécanistiques de la désaturation des acides gras, du remodelage lipidomique et des réponses des voies de signalisation aux perturbations de la saturation des lipides membranaires.

Les particules d'activation lentivirales SCD5 (h2) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de SCD5 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales SCD5 (h2) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription SCD5, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de SCD5. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif SCD5 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.