SCD CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401516-ACT

Das humane SCD kodiert die Stearoyl‑CoA‑Desaturase, eine Oxidoreduktase des endoplasmatischen Retikulums, die die Δ9‑Desaturierung gesättigter Fettsäure‑Acyl‑CoAs zu einfach ungesättigten Fettsäuren wie Oleat und Palmitoleat katalysiert. Indem SCD die Lipidzusammensetzung von Membranen prägt und Substrate für die Synthese von Triglyzeriden, Phospholipiden und Cholesterinestern bereitstellt, beeinflusst es die Biogenese von Lipidtröpfchen, die ER‑Homöostase sowie metabolische Signalwege, einschließlich SREBP‑ und PPAR‑regulierter Programme. Eine veränderte SCD‑Aktivität wurde mit einer fehlregulierten Lipogenese, oxidativen und ER‑Stressantworten und weitreichenden metabolischen Phänotypen in Verbindung gebracht, die für Adipositas, Insulinresistenz und die Biologie der Fettleber relevant sind. Diese Funktionen überschneiden sich zudem mit proliferativen und entzündlichen Zuständen, in denen Lipid‑Remodeling das Zellwachstum und die Stressanpassung unterstützt.

SCD Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SCD-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

SCD Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SCD-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SCD-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen SCD-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SCD-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von SCD-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des SCD-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SCD-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.