SATB2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-431818

Panoramica

Satb2 codifica SATB2, un regolatore trascrizionale associato alla matrice nucleare che si lega a elementi di DNA ricchi in AT e organizza la struttura della cromatina di ordine superiore per coordinare programmi di espressione genica specifici di linea nelle cellule di topo. SATB2 influenza reti trascrizionali dello sviluppo e la regolazione epigenetica, incidendo su processi quali differenziamento, patterning tissutale e maturazione neuronale tramite la modulazione dell’accessibilità della cromatina e di interazioni a lunga distanza tra enhancer e promotori. Nel sistema immunitario e in altri tessuti, le proteine della famiglia SATB integrano risposte trascrizionali dipendenti dai segnali plasmando l’architettura del genoma e il reclutamento di co-regolatori. Un’attività di SATB2 deregolata è associata ad alterati stati di differenziamento e a firme di espressione genica aberranti, rilevanti per fenotipi dello sviluppo e per la riprogrammazione trascrizionale associata a malattie.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SATB2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Satb2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Satb2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Satb2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SATB2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Satb2 per lo studio della segnalazione di SATB2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Satb2 critici per la funzione di SATB2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Satb2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SATB2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal SATB2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Satb2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SATB2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR SATB2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Satb2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Satb2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.