Plásmido CRISPR de Activación (m) Sarcospan: sc-421332-ACT

El gen Sspn de ratón codifica sarcospan, una pequeña proteína de membrana tipo tetraspanina que se asocia con el complejo distrofina–glicoproteína y con subcomplejos de sarcoglicanos relacionados para sostener la estabilidad del sarcolema y una transmisión eficiente de la fuerza en el músculo estriado. Sarcospan contribuye a la organización de la membrana, al tráfico de proteínas y a eventos de señalización vinculados a la adhesión a la matriz extracelular y al acoplamiento con el citoesqueleto. La alteración de la función o la expresión de SSPN se estudia en el contexto de vías relacionadas con distrofias musculares, la fragilidad de las fibras musculares y las respuestas de remodelación en músculo esquelético y cardíaco. Como modulador del ensamblaje de complejos de membrana, Sspn es relevante para investigaciones sobre degeneración y regeneración muscular, así como mecanotransducción, en modelos murinos.

Sarcospan El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Sspn sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Sarcospan El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Sspn en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Sspn, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Sarcospan. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Sspn y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Sarcospan en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Sarcospan en células tumorales con expresión de Sspn silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.