Plasmide Double Nickase (h) SAP: sc-402165-NIC

APCS code pour le composant amyloïde P sérique (SAP), une protéine de reconnaissance de motifs de la famille des pentraxines qui circule dans le plasma et se lie à des ligands de manière dépendante du calcium, notamment l’ADN, la chromatine et des polysaccharides microbiens. SAP contribue à la surveillance immunitaire innée et à l’opsonisation en mobilisant des processus associés au complément et des voies d’élimination médiées par les récepteurs Fc, et peut s’associer à des composants de la matrice extracellulaire lors des réponses inflammatoires. Grâce à sa forte affinité de liaison pour les fibrilles amyloïdes et d’autres agrégats de protéines mal repliées, SAP est largement utilisée comme outil moléculaire pour étudier la biologie de l’amyloïde, les dépôts protéiques et la persistance d’agrégats extracellulaires dans les tissus. Des interactions SAP altérées et des modifications régulatrices liées à APCS ont été étudiées dans le contexte de l’inflammation systémique et de pathologies associées à l’amyloïde, étayant des travaux mécanistiques sur la gestion des complexes immuns et la stabilisation des agrégats.

SAP Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus APCS dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de APCS. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de APCS. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de APCS.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.