SAP Double Nickase Plasmid (h): sc-402165-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das SAP Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- SAP Double-Nickase-Plasmid (h) und SAP Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf APCS abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: SAP: sc-393948
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
SAP Double Nickase Plasmid (h) | sc-402165-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SAP Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402165-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
APCS kodiert die Serum-Amyloid-P-Komponente (SAP), ein Mustererkennungsprotein aus der Pentraxin-Familie, das im Plasma zirkuliert und Liganden calciumabhängig bindet, darunter DNA, Chromatin und mikrobielle Polysaccharide. SAP trägt zur angeborenen Immunüberwachung und Opsonisierung bei, indem es komplementassoziierte Prozesse und Fc-Rezeptor-vermittelte Clearance-Wege aktiviert, und es kann sich während entzündlicher Reaktionen mit Komponenten der extrazellulären Matrix assoziieren. Durch seine starke Bindung an Amyloidfibrillen und andere fehlgefaltete Proteinaggregate wird SAP weithin als molekulares Werkzeug genutzt, um die Amyloidbiologie, Proteinablagerung und die Persistenz extrazellulärer Aggregate in Geweben zu untersuchen. Veränderte SAP-Interaktionen und mit APCS verknüpfte regulatorische Veränderungen wurden im Zusammenhang mit systemischer Entzündung und amyloidassoziierten Pathologien untersucht und stützen mechanistische Studien zur Handhabung von Immunkomplexen und zur Stabilisierung von Aggregaten.
SAP Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des APCS-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von APCS abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die APCS-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit APCS-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.