Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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SAP 97 Double Nickase Plasmid (h): sc-400865-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das SAP 97 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- SAP 97 Double-Nickase-Plasmid (h) und SAP 97 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf DLG1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: SAP 97: sc-9961
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
SAP 97 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400865-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SAP 97 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400865-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DLG1 kodiert das synapsenassoziierte Protein 97 (SAP97), ein membranassoziiertes Gerüstprotein der MAGUK-Familie (membrane-associated guanylate kinase), das Multiproteinkomplexe an Zell-Zell-Kontakten und neuronalen Synapsen organisiert. SAP97 koordiniert den Transport und die Stabilisierung ionotroper Glutamatrezeptoren und anderer Kanäle und koppelt sie an Zytoskelett- und Signalgebungskomponenten, um synaptische Stärke und Polarität zu formen. Über PDZ-, SH3- und GK-Domänen-vermittelte Interaktionen integriert SAP97 Signalmodule, die an Adhäsion, Erregbarkeit und dem Umbau von Zellkontakten beteiligt sind. Veränderte DLG1/SAP97-Expression oder -Lokalisation wurde im Zusammenhang mit neurodevelopmentalen und neuropsychiatrischen Phänotypen sowie mit Störungen der epithelialen Polarität und tumorassoziierten Veränderungen in Zelladhäsions-Signalwegen untersucht.
SAP 97 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des DLG1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von DLG1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die DLG1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit DLG1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.