SAP 18 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404214-ACT

SAP18 kodiert SAP18, eine konservierte Komponente des Sin3A/HDAC-Transkriptions-Korepressorkomplexes, die DNA-bindende Repressoren mit der Histondeacetylierung und der Chromatinkondensation verknüpft. Über diese Funktion trägt SAP18 zur epigenetischen Regulation von Genexpressionsprogrammen bei, die den Zellzyklusfortschritt, die Differenzierung und stressresponsive Transkription steuern. Veränderte Korepressor- und HDAC-assoziierte Netzwerke werden häufig mit fehlregulierten Transkriptionszuständen in der Krebsbiologie sowie mit Erkrankungen in Verbindung gebracht, die durch eine aberrante Chromatinregulation gekennzeichnet sind. SAP18 wird daher häufig im Kontext der Dynamik transkriptioneller Repression, des Chromatin-Remodelings und der Signalweg-übergreifenden Kontrolle der zellulären Identität untersucht.

SAP 18 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SAP18-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

SAP 18 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SAP18-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SAP18-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen SAP 18-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SAP18-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von SAP 18-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des SAP 18-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SAP18-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.