SAHH CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-402617

Übersicht

AHCY kodiert die S‑Adenosylhomocystein-Hydrolase (SAHH), ein Schlüsselenzym im Methioninzyklus, das S‑Adenosylhomocystein zu Adenosin und Homocystein hydrolysiert. Dadurch erhält es die zelluläre Methylierungskapazität aufrecht, indem es die Rückkopplungshemmung von S‑Adenosylmethionin‑abhängigen Methyltransferasen aufhebt. Über diese Funktion beeinflusst SAHH die epigenetische Regulation, die Methylierung von RNA und Proteinen sowie die Phospholipidbiosynthese und verknüpft den Ein‑Kohlenstoff‑Stoffwechsel mit der übergeordneten Steuerung von Genexpressionsprogrammen. Störungen der AHCY‑Aktivität können das Methylierungspotenzial und die metabolische Homöostase verschieben und damit Signalwege beeinflussen, die mit Proliferation, Differenzierung und Stressantworten verbunden sind. Eine veränderte SAHH‑Funktion wurde im Zusammenhang mit methylierungsassoziierten Erkrankungen sowie mit zellulären Phänotypen untersucht, die für die Krebsbiologie sowie für Modelle der Immun‑ und Neurowissenschaften relevant sind.

Das SAHH CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des AHCY-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des AHCY-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von AHCY nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die SAHH-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von AHCY-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der SAHH-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf AHCY-Exone abzielen, die für die SAHH-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere AHCY-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom SAHH CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom SAHH CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des AHCY-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das SAHH HDR-Plasmid (h) und SAHH HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von AHCY-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten AHCY-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.