S-100PBP CRISPR Activation Plasmid (h2): sc-413030-ACT-2

Humanes S100PBP (S-100P-Bindungsprotein), kodiert durch S100PBP, fungiert als intrazellulärer Bindungspartner des calcium-bindenden Proteins S100P und wird mit der Koordination von Ca2+-abhängiger Signalübertragung mit der Zytoskelettorganisation sowie der Dynamik der Zelladhäsion in Verbindung gebracht. Das Protein wurde mit der Regulation mikrotubuli-assoziierter Prozesse verknüpft und könnte über Protein-Protein-Interaktionsnetzwerke, die zelluläre Polarität und Motilität modulieren, den vesikulären Transport und zellzyklusbezogene Ereignisse beeinflussen. Veränderte Expressionsmuster von S100PBP wurden in mehreren Tumorkontexten beschrieben, was seine Eignung zur Untersuchung von Mechanismen zugrunde liegender Migration, Invasion und epithelial-mesenchymaler Transitionen unterstützt, ohne dabei klinische Outcomes zu implizieren. Geneditierung oder anderweitige Perturbation von S100PBP in humanen Zellmodellen ermöglicht die funktionelle Analyse S100P-zentrierter Signalwege, die Kartierung von Interaktionspartnern sowie die Bewertung nachgelagerter transkriptioneller und phänotypischer Effekte, die für die Krebsbiologie- und Zellsignaltransduktionsforschung relevant sind.

S-100PBP Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h2) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen S100PBP-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

S-100PBP Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h2) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des S100PBP-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der S100PBP-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen S-100PBP-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native S100PBP-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von S-100PBP-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des S-100PBP-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem S100PBP-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.