Plasmide CRISPR d'Activation (h) S-100A16: sc-406149-ACT

S100A16 code S-100A16, une petite protéine de liaison au calcium de type EF-hand appartenant à la famille S100, qui relie la dynamique intracellulaire du Ca²⁺ à la signalisation cellulaire et à l’organisation du cytosquelette. En modulant les interactions protéine–protéine de manière dépendante du calcium, S-100A16 a été associée à des processus tels que la motilité cellulaire, la différenciation et des programmes transcriptionnels répondant au stress. Une expression dérégulée de S100A16 a été rapportée dans de multiples contextes pathologiques, notamment des cancers ainsi que des phénotypes fibrotiques ou métaboliques, où elle pourrait influencer la plasticité épithélio-mésenchymateuse et le remodelage du microenvironnement. Ces caractéristiques font de S-100A16 une cible utile pour étudier les réseaux de signalisation régulés par le calcium et les transitions phénotypiques dans les cellules humaines.

S-100A16 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de S100A16 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

S-100A16 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus S100A16 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription S100A16, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de S-100A16. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus S100A16 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de S-100A16 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie S-100A16 dans les cellules tumorales présentant une expression de S100A16 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.