Plasmide CRISPR d'Activation (h) S-100A10: sc-402230-ACT

S100A10 code pour S-100A10 (p11), un membre de la famille S100 liant le Ca2+ qui forme un hétérotétramère fonctionnel avec l’annexine A2 à la membrane plasmique et dans les compartiments endosomaux. Ce complexe coordonne l’activation du plasminogène et la protéolyse péricellulaire, influençant le remodelage de la matrice extracellulaire, l’adhérence cellulaire et la migration dirigée via des processus impliquant le cytosquelette et le trafic membranaire. S-100A10 participe également aux voies de signalisation inflammatoire et de réponse au stress en modulant la localisation des récepteurs et les réseaux de protéases à la surface cellulaire. Une expression dérégulée de S100A10 a été rapportée dans de nombreux contextes pathologiques, notamment l’invasion et les métastases associées au cancer, le remodelage vasculaire et fibrotique, ainsi que des phénotypes neuro-inflammatoires, ce qui étaye son intérêt en tant que cible mécanistique pour des recherches axées sur des voies biologiques.

S-100A10 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de S100A10 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

S-100A10 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus S100A10 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription S100A10, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de S-100A10. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus S100A10 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de S-100A10 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie S-100A10 dans les cellules tumorales présentant une expression de S100A10 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.