Plasmide CRISPR/Cas9 KO RyR-2 (h): sc-402986

Présentation

RYR2 code le récepteur à la ryanodine de type 2 (RyR-2), un canal tétramérique intracellulaire de libération du Ca²⁺ situé sur le réticulum sarcoplasmique/endoplasmique, qui assure le couplage excitation–contraction en déclenchant une libération de calcium induite par le calcium. L’activité de RyR-2 coordonne les transitoires de Ca²⁺ qui régulent la contraction des cardiomyocytes, le métabolisme mitochondrial et des voies de signalisation dépendantes du Ca²⁺, notamment les réponses transcriptionnelles liées à CaMKII et à la voie calcineurine/NFAT. La fonction du canal est modulée par l’assemblage en complexes macromoléculaires, les modifications post-traductionnelles et la détection du Ca²⁺ luminal, intégrant les signaux adrénergiques à l’homéostasie intracellulaire du Ca²⁺. Les perturbations génétiques et fonctionnelles de RYR2 sont associées à des syndromes héréditaires d’arythmie et à des phénotypes liés aux cardiomyopathies, ce qui en fait un nœud central pour l’étude de la gestion du calcium cardiaque et de la signalisation sensible au stress.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO RyR-2 CRISPR/Cas9 Knockout (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène RYR2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du RYR2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert RYR2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine RyR-2 CRISPR/Cas9 Knockout.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en RYR2 pour l'étude de la signalisation de RyR-2 CRISPR/Cas9 Knockout, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de RYR2 essentiels à la fonction de RyR-2 CRISPR/Cas9 Knockout
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de RYR2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le RyR-2 CRISPR/Cas9 Knockout plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le RyR-2 CRISPR/Cas9 Knockout plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus RYR2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le RyR-2 CRISPR/Cas9 Knockout plasmide HDR (h) et le RyR-2 CRISPR/Cas9 Knockout (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie RYR2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles RYR2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.