Particules Lentivirales d'Activation (h) RyR-1: sc-401470-LAC

RYR1 code le récepteur de la ryanodine 1 (RyR‑1), un grand canal de libération du Ca²⁺ intégré au réticulum sarcoplasmique/endoplasmique, qui couple la dépolarisation membranaire aux flux intracellulaires de Ca²⁺. En contrôlant la libération rapide de calcium induite par le calcium et le couplage excitation–contraction, RyR‑1 coordonne en aval une signalisation Ca²⁺‑dépendante qui influence le métabolisme, la fonction mitochondriale et des programmes de transcription dépendants de l’activité. Une fonction ou une expression dérégulée de RYR1 perturbe l’homéostasie du calcium et est associée à la physiopathologie du muscle squelettique, ce qui en fait un nœud central pour l’étude des réseaux de signalisation du Ca²⁺ dans les myocytes humains et les modèles musculaires issus d’ingénierie. La modulation expérimentale de RYR1 est couramment utilisée pour étudier l’ouverture/fermeture du canal, la dynamique des stocks de Ca²⁺ et les interactions entre voies avec des réponses au stress telles que la protéostasie du RE/RS.

Les particules d'activation lentivirales RyR-1 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de RYR1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales RyR-1 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription RYR1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de RyR-1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif RYR1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.