Plasmide CRISPR d'Activation (h) RUNX1: sc-400803-ACT

RUNX1 (AML1) est un facteur de transcription spécifique de séquence du complexe « core-binding factor » (CBF), qui orchestre la spécification des cellules souches et progénitrices hématopoïétiques, leur engagement de lignée et la maturation des populations myéloïdes et lymphoïdes. Il régule des programmes géniques contrôlant la prolifération, la différenciation et l’apoptose via sa liaison aux enhancers et aux promoteurs, de concert avec des cofacteurs tels que CBFβ et des complexes de remodelage de la chromatine, en interaction avec des réseaux de signalisation cytokiniques et du développement. Des altérations de la dose ou de la fonction de RUNX1 sont fortement associées aux hémopathies malignes et aux syndromes d’insuffisance médullaire, notamment via des translocations récurrentes et des mutations ponctuelles qui perturbent le contrôle transcriptionnel de l’hématopoïèse. En tant que nœud central des décisions de destinée des cellules sanguines, RUNX1 est largement étudié dans le cadre de la régulation transcriptionnelle, du remodelage épigénétique et de la modélisation de voies pertinentes pour la leucémie.

RUNX1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de RUNX1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

RUNX1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus RUNX1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription RUNX1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de RUNX1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus RUNX1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de RUNX1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie RUNX1 dans les cellules tumorales présentant une expression de RUNX1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.