Plásmido CRISPR de Activación (m) RTP1: sc-433714-ACT

El gen Rtp1 de ratón codifica la proteína transportadora de receptores 1 (RTP1), un factor accesorio asociado a membrana que promueve el procesamiento en el retículo endoplásmico, el tráfico y la expresión funcional en la superficie de los receptores olfatorios en las neuronas sensoriales olfativas. Al facilitar la maduración del receptor y su exportación a través de la vía secretora, RTP1 influye en la competencia de señalización de los GPCR y en la transducción sensorial evocada por olores. La expresión de Rtp1 está estrechamente vinculada a programas de diferenciación neuronal dentro del epitelio olfatorio y puede moldear la funcionalidad del repertorio de receptores en la superficie celular. La desregulación de la maquinaria de tráfico de receptores, como RTP1, es relevante para estudios de disfunción sensorial, respuestas al estrés neuronal y biogénesis de GPCR en neurobiología.

RTP1 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Rtp1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

RTP1 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Rtp1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Rtp1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de RTP1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Rtp1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de RTP1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía RTP1 en células tumorales con expresión de Rtp1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.