RSP3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-413513

Übersicht

RSPH3 kodiert das Homolog des radialen Speichenkopfs 3 (RSP3), eine strukturelle Komponente des radialen Speichenkomplexes in motilen Zilien und Flagellen, die dazu beiträgt, die Aktivität axonemaler Dyneine mit einem koordinierten Gleiten der Mikrotubuli und der Regulation des Zilienschlags zu koppeln. Durch seine Funktion innerhalb der 9+2-Axonem-Architektur unterstützt RSP3 die korrekte Bildung der Schlagwellenform und eine effiziente mukoziliäre Clearance. Störungen der Assemblierung oder Signalübertragung der radialen Speichen sind mit motilen Ziliopathien verbunden, darunter Phänotypen der primären Ziliendyskinesie, die durch eine beeinträchtigte Zilienmotilität gekennzeichnet sind. Daher wird RSPH3 häufig im Kontext von Signalwegen untersucht, die die Zilienbiogenese, die axonemale Organisation sowie die Physiologie der Atemwege und des Reproduktionstrakts steuern.

Das RSP3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des RSPH3-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des RSPH3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von RSPH3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die RSP3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von RSPH3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der RSP3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf RSPH3-Exone abzielen, die für die RSP3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere RSPH3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom RSP3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom RSP3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des RSPH3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das RSP3 HDR-Plasmid (h) und RSP3 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von RSPH3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten RSPH3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.