Plasmide CRISPR d'Activation (h) RSAD2: sc-402884-ACT

RSAD2 (viperine) est un effecteur antiviral induit par l’interféron, qui se localise au réticulum endoplasmique et aux gouttelettes lipidiques, et dont l’expression est rapidement déclenchée en aval de la signalisation des récepteurs de reconnaissance des motifs (PRR). Elle participe aux voies de l’immunité innée coordonnées par les interférons de type I et NF-κB, en façonnant les réponses cellulaires à l’infection virale via la modulation de processus associés aux membranes et de l’immunométabolisme. RSAD2 a été associée à la régulation de la signalisation inflammatoire et de la production de cytokines, et son expression sert de marqueur moléculaire de l’activation de la voie des interférons. Une activité dérégulée de RSAD2 et des signatures d’interféron sont fréquemment étudiées dans le contexte des infections virales chroniques et des pathologies immunitaires associées aux interférons.

RSAD2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de RSAD2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

RSAD2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus RSAD2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription RSAD2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de RSAD2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus RSAD2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de RSAD2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie RSAD2 dans les cellules tumorales présentant une expression de RSAD2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.