RRP8 Lentiviral Activation Particles (m): sc-430400-LAC

Das murine Gen *Rrp8* kodiert RRP8, eine nukleoläre RNA-Methyltransferase, die über die Reifung und Verarbeitung der Prä-rRNA sowie die Assemblierung funktioneller ribosomaler Untereinheiten an der Ribosomenbiogenese beteiligt ist. Durch die Unterstützung einer korrekten rRNA-Modifikation und der Homöostase des Nukleolus beeinflusst RRP8 die globale Translationskapazität, die Zellzyklusprogression und zelluläre Antworten auf Wachstums- und Stresssignale. Störungen von Faktoren der Ribosomenbiogenese sind häufig mit nukleolärem Stress und veränderter Proteostase verknüpft – Prozesse, die oft im Kontext von Entwicklungsdefekten und krebsassoziierter Fehlregulation untersucht werden. RRP8 stellt daher einen nützlichen Ansatzpunkt dar, um Signalwege zu untersuchen, die rRNA-Prozessierung mit Proliferation, Genomstabilität und Transkriptionsprogrammen koppeln.

RRP8 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Rrp8-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

RRP8 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Rrp8-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen RRP8-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Rrp8-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.