Rrn3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-403709

Übersicht

RRN3 kodiert Rrn3, einen mit RNA-Polymerase I (Pol I) assoziierten Transkriptionsfaktor, der die Rekrutierung von RNA-Polymerase I an die ribosomale DNA unterstützt und die prä-rRNA-Synthese fördert, wodurch Wachstumssignale mit der Ribosomenbiogenese verknüpft werden. Die Rrn3-Aktivität wird durch nährstoff- und stressabhängige Signalwege reguliert, einschließlich einer mTOR-abhängigen Kontrolle der Pol-I-Initiation, und trägt durch die Steuerung der rRNA-Produktion zur Funktion des Nukleolus und zur Proteostase bei. Da die rDNA-Transkription eng mit Proliferation und der Anpassung an zellulären Stress gekoppelt ist, werden veränderte RRN3–Pol-I-Dynamiken im Zusammenhang mit fehlreguliertem Wachstum, genomischer Instabilität und Phänotypen des nukleolären Stresses untersucht. RRN3 ist daher relevant, um zu erforschen, wie die Ribosomenbiogenese mit der Zellzykluskontrolle und metabolischer Reprogrammierung zusammenwirkt.

Das Rrn3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des RRN3-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des RRN3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von RRN3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Rrn3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von RRN3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Rrn3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf RRN3-Exone abzielen, die für die Rrn3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere RRN3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Rrn3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Rrn3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des RRN3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Rrn3 HDR-Plasmid (h) und Rrn3 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von RRN3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten RRN3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.