RPGR CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-404441

Übersicht

RPGR (Retinitis-pigmentosa-GTPase-Regulator) kodiert ein Zilienprotein, das am verbindenden Zilium (Connecting Cilium) von Photorezeptoren angereichert ist und dort den intraflagellären Transport sowie den Transport membranassoziierter Fracht unterstützt, die für die Aufrechterhaltung des Außensegments erforderlich ist. RPGR interagiert mit zilienassoziierten Komplexen und trägt zu mikrotubulusbasierten Transportprozessen bei, die die Zilienstruktur und die Signalübertragungsfähigkeit erhalten. Eine Störung von RPGR beeinträchtigt die Zilienfunktion und die Homöostase der Photorezeptoren und verbindet seinen Funktionsverlust mit erblichen Netzhautdegenerations-Phänotypen wie der X‑chromosomal vererbten Retinitis pigmentosa. In der biomedizinischen Forschung wird RPGR häufig im Zusammenhang mit Mechanismen von Ziliopathien, der Zellbiologie von Photorezeptoren sowie Genotyp-Phänotyp-Beziehungen bei Netzhauterkrankungen untersucht.

Das RPGR CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des RPGR-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des RPGR-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von RPGR nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die RPGR-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von RPGR-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der RPGR-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf RPGR-Exone abzielen, die für die RPGR-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere RPGR-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom RPGR CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom RPGR CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des RPGR-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das RPGR HDR-Plasmid (h) und RPGR HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von RPGR-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten RPGR-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.