Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plasmide Double Nickase (h) RPA194: sc-400816-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) RPA194 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide RPA194 Double Nickase (h) et le plasmide RPA194 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant POLR1A. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: RPA194 Antibody (C-1): sc-48385
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) RPA194 | sc-400816-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) RPA194 | sc-400816-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
POLR1A code pour RPA194, la sous-unité catalytique de l’ARN polymérase I, qui assure dans le nucléole la synthèse du pré-ARNr 47S, une étape limitante de la biogenèse des ribosomes. RPA194 agit au sein de la machinerie de transcription de Pol I pour soutenir l’organisation nucléolaire, la croissance cellulaire et la coordination du traitement des ARN ribosomiques avec l’état métabolique de la cellule. Une perturbation de la transcription de l’ARNr dépendante de POLR1A modifie la signalisation du stress nucléolaire et les réponses associées à p53 en aval, reliant cette voie au contrôle du cycle cellulaire et à la surveillance du génome. Les variations génétiques et la dérégulation de l’activité de Pol I ont été associées à des phénotypes liés aux ribosomopathies et sont largement étudiées dans le contexte de la biologie de la prolifération et de l’adaptation au stress.
RPA194 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus POLR1A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de POLR1A. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de POLR1A. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de POLR1A.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.