Plasmide CRISPR/Cas9 KO RP1L1 (h): sc-405790

Présentation

RP1L1 (RP1-like 1) code une protéine associée aux microtubules, fortement exprimée dans les cellules photoréceptrices, où elle contribue à l’organisation et à la stabilité du cytosquelette axonémal au sein du cil connecteur et du segment externe. Par son association avec les microtubules et l’architecture ciliaire, RP1L1 participe à la morphogenèse des photorécepteurs, à l’alignement des disques du segment externe et aux processus de trafic indispensables à la phototransduction. Une altération de la fonction de RP1L1 est liée à des dystrophies rétiniennes héréditaires, notamment la dystrophie maculaire et des phénotypes apparentés, soulignant son rôle dans le maintien de la structure rétinienne et de l’intégrité de la signalisation visuelle. RP1L1 est donc pertinente pour l’étude de la régulation du cytosquelette dépendante des cils, du transport protéique compartimenté et des mécanismes de vulnérabilité des photorécepteurs.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO RP1L1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène RP1L1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du RP1L1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert RP1L1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine RP1L1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en RP1L1 pour l'étude de la signalisation de RP1L1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de RP1L1 essentiels à la fonction de RP1L1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de RP1L1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le RP1L1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le RP1L1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus RP1L1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le RP1L1 plasmide HDR (h) et le RP1L1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie RP1L1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles RP1L1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.