Plasmide CRISPR/Cas9 KO RORβ (m): sc-432582
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- RORβ Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique RORβ, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: RORβ Antibody (4B4): sc-293471
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO RORβ (m) | sc-432582 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Rorb code le récepteur nucléaire RORβ (retinoic acid receptor-related orphan receptor beta), un facteur de transcription régulé par des ligands qui se fixe à des éléments de réponse ROR afin de contrôler des programmes d’expression génique spécifiques de certains types cellulaires. Chez la souris, RORβ est fortement exprimé dans le système nerveux central et la rétine, où il contribue à la différenciation neuronale, à l’organisation laminaire, aux rythmes transcriptionnels liés au rythme circadien et aux réseaux de gènes associés aux photorécepteurs. En tant que membre de l’axe ROR/REV-ERB, il s’inscrit à l’interface de voies transcriptionnelles développementales et métaboliques qui façonnent l’identité neuronale et la fonction synaptique. Des altérations de la régulation dépendante de RORβ ont été associées à des phénotypes neurodéveloppementaux et sensoriels, ce qui étaye son utilisation dans des études portant sur la formation des circuits neuronaux et la biologie rétinienne.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO RORβ (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Rorb dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Rorb, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Rorb à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine RORβ.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Rorb pour l'étude de la signalisation de RORβ, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Rorb essentiels à la fonction de RORβ
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Rorb pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le RORβ plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le RORβ plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Rorb. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le RORβ plasmide HDR (m) et le RORβ (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Rorb pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Rorb définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.