RORβ Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-432582

Panoramica

Rorb codifica per il recettore nucleare RORβ (retinoic acid receptor-related orphan receptor beta), un fattore di trascrizione regolato da ligando che si lega agli elementi di risposta ROR per controllare programmi di espressione genica specifici per tipo cellulare. Nel topo, RORβ è arricchito nel sistema nervoso centrale e nella retina, dove contribuisce alla differenziazione neuronale, alla definizione dell’organizzazione laminare, ai ritmi trascrizionali legati al ciclo circadiano e alle reti geniche associate ai fotorecettori. In quanto membro dell’asse ROR/REV-ERB, interseca vie trascrizionali dello sviluppo e del metabolismo che plasmano l’identità neuronale e la funzione sinaptica. Alterazioni della regolazione dipendente da RORβ sono state associate a fenotipi neuroevolutivi e sensoriali, a supporto del suo impiego in studi sulla formazione dei circuiti neurali e sulla biologia della retina.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO RORβ (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Rorb in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Rorb insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Rorb a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina RORβ.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Rorb per lo studio della segnalazione di RORβ, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Rorb critici per la funzione di RORβ
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Rorb per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal RORβ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal RORβ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Rorb. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal RORβ Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR RORβ (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Rorb per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Rorb definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.