Plasmide Double Nickase (h) Rock-2: sc-400468-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Rock-2 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Rock-2 Double Nickase (h) et le plasmide Rock-2 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ROCK2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Rock-2 Antibody (D-11): sc-398519
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Rock-2 | sc-400468-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Rock-2 | sc-400468-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène humain **ROCK2** code la protéine kinase 2 contenant des domaines en hélice enroulée associée à Rho (Rock-2), une kinase sérine/thréonine qui agit en aval de RhoA pour contrôler la contractilité actomyosine, la formation de fibres de stress, la dynamique des adhérences focales et la polarité cellulaire. La signalisation ROCK2 s’articule avec des programmes de remodelage du cytosquelette qui influencent la migration cellulaire, la cytocinèse et la mécanotransduction, avec des effets en aval sur la phosphorylation de la chaîne légère de la myosine et le renouvellement de l’actine médié par LIMK/cofiline. Une activité altérée de ROCK2 a été associée à une dérégulation du tonus vasculaire et de la fonction endothéliale, à des réponses fibrosantes dues à l’activation des myofibroblastes, ainsi qu’à des phénotypes invasifs dans des modèles de cellules tumorales. Ces liens entre voies de signalisation font de ROCK2 un nœud largement utilisé pour étudier la régulation du cytosquelette dépendante des GTPases Rho et des dépendances de signalisation spécifiques au contexte.
Rock-2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ROCK2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ROCK2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ROCK2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ROCK2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.