Rock-2 CRISPR Activationプラスミド (r): sc-437370-ACT

Rho 関連コイルドコイル含有プロテインキナーゼ 2（ROCK2；Rock-2）は、RhoA の下流で作用するセリン／スレオニンキナーゼであり、アクトミオシン収縮性、ストレスファイバー形成、フォーカルアドヒージョンの動態、ならびに細胞骨格の再構築を制御します。ミオシン軽鎖や LIM キナーゼなどの基質をリン酸化することにより、ROCK2 は Rho/ROCK シグナルを、細胞形態、細胞運動、神経突起の退縮、平滑筋トーヌスを制御する経路と統合します。ラットモデルでは、細胞骨格張力の異常や細胞移動が病態に寄与する血管リモデリング、線維化、神経炎症、損傷応答の文脈で、ROCK2 活性の変化がしばしば研究されます。ROCK2 依存性シグナルは、多様な組織におけるメカノトランスダクションや上皮―間葉系様の転換にも関与しており、収縮性駆動型の表現型を解析するためのハブ（結節点）として有用です。

Rock-2 CRISPR活性化プラスミド（r）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Rock-2 CRISPR 活性化プラスミド (r) は、ヒト細胞株における 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体は転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Rock-2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然の遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるRock-2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、および発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるRock-2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。