Plasmide CRISPR/Cas9 KO Rock-1 (h): sc-400367

Présentation

ROCK1 code la protéine kinase 1 associée à Rho et contenant un domaine en hélice enroulée (Rock-1), une kinase sérine/thréonine qui agit comme principal effecteur de RhoA pour réguler la contractilité actomyosine et le remodelage du cytosquelette. Rock-1 phosphoryle des substrats clés contrôlant la formation des fibres de stress, la dynamique des adhérences focales et l’activité de la chaîne légère de la myosine, reliant la signalisation Rho/ROCK à la forme cellulaire, la motilité, l’adhérence et la cytocinèse. Par ces processus, ROCK1 contribue à la mécanotransduction et à l’architecture tissulaire, et son dérèglement a été associé à des comportements invasifs altérés ainsi qu’à des réponses vasculaires et fibrosantes anormales dans la physiopathologie. ROCK1 est également impliquée dans des contextes de signalisation de l’apoptose et de l’inflammation, ce qui en fait un nœud pertinent pour analyser les interactions entre voies dans divers modèles cellulaires.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Rock-1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ROCK1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ROCK1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ROCK1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Rock-1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ROCK1 pour l'étude de la signalisation de Rock-1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ROCK1 essentiels à la fonction de Rock-1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ROCK1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Rock-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Rock-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ROCK1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Rock-1 plasmide HDR (h) et le Rock-1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ROCK1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ROCK1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.