RNF8 Lentiviral Activation Particles (h): sc-401909-LAC

ヒトRNF8は、DNA二本鎖切断（DSB）部位におけるユビキチンシグナル伝達を触媒し、DNA損傷応答を統括するRINGフィンガー型E3ユビキチンリガーゼをコードする。ATM/ATR経路とのクロストークを介して、RNF8は53BP1やBRCA1をはじめとする主要な修復因子のリクルートと保持を促進し、さらにチェックポイント活性化や修復経路選択を制御する下流のユビキチン依存的複合体の形成を導く。RNF8はクロマチンリモデリングやゲノム安定性の維持にも関与しており、その活性は遺伝毒性ストレス下での細胞周期停止、アポトーシス、老化といった細胞運命と結び付いている。RNF8依存的ユビキチン化の破綻は、複数のがん関連状況やその他のDNA修復異常疾患で観察される、ゲノム不安定性表現型や損傷シグナル伝達の変化と関連づけられている。

RNF8 レンチウイルス活性化粒子（h）は、完全な相乗的活性化メディエーター（SAM）転写活性化システムを、トランスダクション可能な高力価レンチウイルス粒子に封入することでこのニーズに対応し、より広範なヒト細胞タイプにおいて効率的なRNF8の発現上昇を可能にします。

RNF8 レンチウイルス活性化粒子（h）は、レンチウイルス媒介を介して、シナジー活性化メディエーター（SAM）システムのすべての機能的構成要素を届ける。このシステムは、標的細胞へ共導入される3種類の粒子製剤で構成されています。1つは、VP64転写活性化ドメインとブラスティシジン耐性遺伝子を融合させた、触媒活性のないdCas9（D10AおよびN863A変異）をコードするものです。ヒグロマイシン耐性遺伝子を有するMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードするもの；および、2つのMS2 RNAアプタマーと融合した標的特異的20塩基対sgRNAをコードし、プロマイシン耐性遺伝子を有するもの。レンチウイルスによる導入および発現カセットのゲノムへの組み込み後、SAM構成要素は安定して発現し、RNF8転写開始点の上流にある近位プロモーター領域内の標的座に集合する。そこでは、VP64、p65、およびHSF1が協調して作用し、内因性の転写機構を動員して、内因性RNF8の発現を持続的に上向きに調節する。ヌクレアーゼ不活性型dCas9を使用することで、二本鎖DNA切断の導入を回避し、天然のRNF8ゲノム座および制御機構を維持します。

レンチウイルス形式には、いくつかの実用的な利点があります。安定したゲノム組み込みにより、細胞分裂を経ても遺伝的に継承される活性化がサポートされます。高力価の粒子調製により、施設内でのウイルス生産の必要性がなくなります。また、初代培養細胞、非増殖性細胞、およびトランスフェクション抵抗性細胞との互換性により、実験の適用範囲が広がります。成功したトランスダクションは、プロマイシン、ハイグロマイシン、ブラスティシジンを用いた三重抗生物質選別により確認および選別が可能である。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。