RNF31 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-412436-ACT

RNF31 codifica uma ligase E3 de ubiquitina que atua como componente catalítico do complexo de montagem de cadeias lineares de ubiquitina (LUBAC), promovendo a ubiquitinação ligada a Met1 de intermediários-chave de sinalização. Por meio da regulação das cascatas de sinalização de NF-κB, do receptor de TNF e da imunidade inata, RNF31 ajuda a coordenar a expressão de genes inflamatórios, a sobrevivência celular e as respostas ao estresse. Sua atividade afeta a proteostase e a terminação de sinais ao moldar interações proteicas dependentes de ubiquitina e a estabilidade de complexos. A desregulação da função de RNF31 tem sido associada a sinalização imune aberrante e ao reforço de vias oncogênicas em múltiplos contextos de doença, tornando-o um alvo útil para estudos mecanísticos de redes de sinalização dirigidas por ubiquitina.

RNF31 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de RNF31 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

RNF31 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus RNF31 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição RNF31, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de RNF31. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus RNF31 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de RNF31 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via RNF31 em células tumorais com expressão de RNF31 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.