Plásmido Doble Nickase (h) RNF25: sc-408040-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)RNF25 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa RNF25 (h) y el plásmido de doble nickasa RNF25 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a RNF25. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: RNF25 Anticuerpo (E-10): sc-398749
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) RNF25 | sc-408040-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) RNF25 | sc-408040-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
RNF25 codifica una ligasa E3 de ubiquitina que contiene un dominio RING finger y que ayuda a regular la estabilidad de las proteínas y la señalización al catalizar la transferencia de ubiquitina a sustratos específicos. Mediante el control dependiente de ubiquitina del recambio proteico y de la composición de los complejos de señalización, RNF25 puede influir en vías vinculadas a las respuestas inmunitarias innatas e inflamatorias, incluida la modulación de programas transcripcionales asociados a NF-κB. Como componente del sistema celular ubiquitina–proteasoma, RNF25 contribuye a la proteostasis y a la terminación de señales, procesos que con frecuencia se ven alterados en la biología del cáncer y en la desregulación inmunitaria. Por lo tanto, la expresión o actividad alteradas de ligasas de ubiquitina como RNF25 son relevantes para estudios de señalización de estrés, transcripción impulsada por citocinas y comunicación cruzada entre vías en células humanas.
RNF25 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus RNF25 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de RNF25. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de RNF25. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con RNF25 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.