Plásmido Doble Nickase (h) RNF20: sc-412695-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)RNF20 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa RNF20 (h) y el plásmido de doble nickasa RNF20 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a RNF20. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: RNF20 Anticuerpo (1594CT552.128.36): sc-517358
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) RNF20 | sc-412695-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) RNF20 | sc-412695-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
RNF20 codifica una ligasa E3 de ubiquitina que, junto con RNF40, forma el complejo BRE1 responsable de la monoubiquitinación de la histona H2B (H2BK120ub). Esta modificación de la cromatina favorece la elongación transcripcional y se acopla a programas posteriores de metilación de histonas, influyendo en la expresión génica a escala genómica, la señalización del daño en el ADN y la elección de la vía de reparación. La actividad de RNF20 se relaciona con el mantenimiento de la estabilidad genómica mediante la regulación de las respuestas a roturas de doble cadena y la remodelación de la cromatina asociada a la replicación. La desregulación de la ubiquitinación de histonas dependiente de RNF20 se ha asociado con redes transcripcionales alteradas y con la inestabilidad genómica observada en múltiples contextos patológicos, lo que respalda su estudio en mecanismos epigenéticos y de reparación del ADN.
RNF20 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus RNF20 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de RNF20. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de RNF20. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con RNF20 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.