Plasmide Double Nickase (h) RNF186: sc-408416-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) RNF186 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide RNF186 Double Nickase (h) et le plasmide RNF186 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant RNF186. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) RNF186 | sc-408416-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) RNF186 | sc-408416-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
RNF186 code une ligase E3 ubiquitine de type RING, localisée au réticulum endoplasmique, qui contribue à réguler le contrôle qualité des protéines et la signalisation en catalysant le transfert d’ubiquitine vers des substrats spécifiques. En agissant sur le renouvellement dépendant de l’ubiquitine et en modulant le stress du RE ainsi que les signalisations inflammatoires, RNF186 peut influencer l’homéostasie épithéliale, les processus associés à la barrière et des voies immuno-réactives telles que les réseaux liés à NF-κB. Des études génétiques et fonctionnelles ont associé des variations de RNF186 et des modifications de son expression à une susceptibilité accrue à des phénotypes inflammatoires, en particulier dans des contextes gastro-intestinaux, ce qui souligne son intérêt pour disséquer les voies reliant la protéostasie à la régulation immunitaire des muqueuses. En tant que nœud de la régulation médiée par l’ubiquitine, RNF186 est fréquemment étudié pour son impact sur la stabilité des substrats, les réponses au stress et les programmes transcriptionnels en aval dans des modèles cellulaires humains.
RNF186 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus RNF186 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de RNF186. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de RNF186. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de RNF186.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.