RNF185 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-416413
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- RNF185 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico RNF185, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
RNF185 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-416413 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
RNF185 codifica una ligasa E3 de ubiquitina tipo RING localizada en la membrana externa mitocondrial, que contribuye al control de calidad proteico al catalizar la transferencia de ubiquitina a sustratos seleccionados. Mediante recambio y señalización dependientes de ubiquitina, RNF185 se ha vinculado con la regulación de la homeostasis mitocondrial, procesos relacionados con la mitofagia y la comunicación entre la función mitocondrial y la señalización inmunitaria innata. Las interacciones descritas con vías de autofagia e inflamación respaldan su relevancia para estudiar respuestas al estrés que conectan el daño de orgánulos con programas transcripcionales posteriores. La alteración de la actividad de RNF185 se ha investigado en contextos en los que se implican la disfunción mitocondrial y la desregulación de la proteostasis, incluidos la neuroinflamación y la reprogramación metabólica asociada al cáncer.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO RNF185 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen RNF185 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del RNF185 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de RNF185 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína RNF185.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en RNF185 para la investigación de la señalización de RNF185, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de RNF185 críticos para la función de RNF185
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de RNF185 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido RNF185 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido RNF185 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus RNF185. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR RNF185 (h) y el plásmido HDR RNF185 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología RNF185 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana RNF185 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.