RNF149 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406588

Descripción general

RNF149 codifica una proteína que contiene un dominio tipo RING, y se predice que actúa como una ligasa E3 de ubiquitina, contribuyendo al control dependiente de ubiquitina de la estabilidad de las proteínas y de la dinámica de las vías de señalización. Las ligasas E3 tipo RING ayudan a regular la proteostasis, las respuestas al estrés y el recambio de componentes de rutas que determinan la progresión del ciclo celular y las decisiones de supervivencia. Por ello, RNF149 es relevante para dilucidar cómo la ubiquitinación y la degradación proteasomal coordinan la homeostasis celular y la transducción de señales. La regulación alterada de la vía de la ubiquitina se asocia con frecuencia con la biología tumoral y con otros trastornos vinculados al control de calidad proteica, lo que hace de RNF149 una diana útil para estudios mecanísticos en modelos relevantes para la enfermedad.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO RNF149 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen RNF149 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del RNF149 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de RNF149 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína RNF149.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en RNF149 para la investigación de la señalización de RNF149, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de RNF149 críticos para la función de RNF149
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de RNF149 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido RNF149 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido RNF149 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus RNF149. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR RNF149 (h) y el plásmido HDR RNF149 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología RNF149 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana RNF149 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.