RNF145 Double Nickase Plasmid (h): sc-416912-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das RNF145 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- RNF145 Double-Nickase-Plasmid (h) und RNF145 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf RNF145 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
RNF145 Double Nickase Plasmid (h) | sc-416912-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
RNF145 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-416912-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
RNF145 kodiert eine multipassige, in der Membran des endoplasmatischen Retikulums (ER) verankerte RING-Finger-E3-Ubiquitin-Ligase, die zur Kontrolle der zellulären Cholesterin- und Lipidhomöostase beiträgt, indem sie die Stabilität zentraler biosynthetischer Enzyme reguliert. Als ER-assoziierter Ubiquitinierungsfaktor ist RNF145 in das Ubiquitin‑Proteasom‑System und sterolabhängige Rückkopplungsprogramme eingebunden, um den Output des Mevalonatwegs und die Zusammensetzung der Membranlipide fein abzustimmen. Diese Regulation unterstützt breitere Prozesse wie ER-Qualitätskontrolle, metabolische Anpassung und stressabhängige Signalwege, die mit der Proteostase verknüpft sind. Eine dysregulierte Sterolmetabolik und gestörte ER-Proteostase werden häufig mit kardiometabolischen und proliferativen Erkrankungen in Verbindung gebracht, was RNF145 zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Studien lipidgetriebener Phänotypen macht.
RNF145 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des RNF145-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von RNF145 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die RNF145-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit RNF145-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.