Plasmide Double Nickase (h) RNF145: sc-416912-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) RNF145 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide RNF145 Double Nickase (h) et le plasmide RNF145 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant RNF145. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) RNF145 | sc-416912-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) RNF145 | sc-416912-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
RNF145 code une ubiquitine‑ligase E3 de type RING finger, membranaire du réticulum endoplasmique (RE) à passages multiples, qui contribue au contrôle de l’homéostasie cellulaire du cholestérol et des lipides en régulant la stabilité d’enzymes biosynthétiques clés. En tant que facteur d’ubiquitination associé au RE, RNF145 s’intègre au système ubiquitine–protéasome et aux programmes de rétrocontrôle sensibles aux stérols afin d’ajuster finement l’activité de la voie du mévalonate et la composition lipidique des membranes. Cette régulation soutient des processus plus larges, notamment le contrôle qualité du RE, l’adaptation métabolique et la signalisation de stress liée à la protéostase. Le dérèglement du métabolisme des stérols et de la protéostase du RE est fréquemment impliqué dans la physiopathologie des maladies cardiométaboliques et prolifératives, ce qui fait de RNF145 une cible utile pour des études mécanistiques des phénotypes pilotés par les lipides.
RNF145 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus RNF145 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de RNF145. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de RNF145. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de RNF145.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.