RNase L CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403412-ACT

Das humane Gen **RNASEL** kodiert **RNase L**, eine durch Interferon induzierbare Endoribonuklease, die durch 2′-5′-Oligoadenylate aktiviert wird, welche während der angeborenen Immunerkennung von **OAS-Proteinen** erzeugt werden. Nach der Aktivierung spaltet RNase L zelluläre und virale RNA, um die Replikation zu begrenzen, das Transkriptom umzubauen und die antivirale Signalgebung zu verstärken – über RNA-Abbauprodukte, die Mustererkennungswege stimulieren. Diese Aktivität überschneidet sich mit Interferon-/JAK-STAT-Programmen, der Biologie von Stressgranula, der Translationskontrolle und der Apoptose und verknüpft RNase L damit mit der Regulation von Entzündung und Entscheidungen über das Zellschicksal. Genetische und funktionelle Veränderungen in **RNASEL** wurden im Kontext der Infektionsbiologie und immunassoziierter Krankheitsmechanismen untersucht, ebenso wie tumorassoziierter Phänotypen, die mit einer fehlregulierten RNA-Homöostase zusammenhängen.

RNase L Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen RNASEL-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

RNase L Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des RNASEL-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der RNASEL-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen RNase L-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native RNASEL-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von RNase L-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des RNase L-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem RNASEL-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.