RNase 8 Double Nickase Plasmid (h): sc-414187-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das RNase 8 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- RNase 8 Double-Nickase-Plasmid (h) und RNase 8 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf RNASE8 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
RNase 8 Double Nickase Plasmid (h) | sc-414187-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
RNase 8 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-414187-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
RNASE8 kodiert RNase 8, ein sezerniertes Mitglied der RNase‑A‑Superfamilie, das zum extrazellulären RNA‑Stoffwechsel und zur angeborenen Immunabwehr an Schleimhautoberflächen beiträgt. Als kationische Ribonuklease wird RNase 8 mit antimikrobieller Aktivität, der Modulation inflammatorischer Signalwege und der Regulation der Homöostase epithelialer Barrieren über RNA‑abhängige Wirt‑Mikroben‑Interaktionen in Verbindung gebracht. Eine dysregulierte Expression von RNASE‑Familien‑Ribonukleasen wurde mit veränderten Zytokinmilieus und Gewebeentzündungen assoziiert, wodurch RNASE8 ein nützliches Ziel zur Aufklärung von Signalwegen ist, die epitheliale Immunität, Infektionsbiologie und Mechanismen entzündlicher Erkrankungen verknüpfen. Studien zu RNASE8 liefern zudem Erkenntnisse darüber, wie sezernierte RNasen das extrazelluläre Transkriptom sowie die Rekrutierung von Immunzellen in lokalen Gewebemikroumgebungen prägen.
RNase 8 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des RNASE8-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von RNASE8 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die RNASE8-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit RNASE8-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.